ELISA实验指南（24）之ELISA的各个阶段详解（七）

1.添加试剂

        免疫分析涉及到在相对小的体积中准确分配试剂。ELISA常用的试剂量为50或100µL /孔，样品为2¨C10µL。操作人员必须充分了解良好的移液技术，并理解克、毫克、微克、纳克的关系，以及体积的等效物，如升、毫升和微升。因此，如果不知道如何配制，例如0.1 M溶液，就不能进行分析。精确稀释的能力也非常重要，以便在进行ELISA或任何其他生物学研究之前解决问题(例如，抗血清稀释1/50，但需要在最终体积为11 mL的体积中补充1.3500稀释)。

1.1移液管 

        微量滴定板系统是与多通道微量滴定移液管结合使用的理想方法。本质上，它们允许通过4、8或12个通道输送试剂，固定或可变体积的25-250 μ L。

还需要提供5-250 μ L的单通道微移液器。样品通常由微量滴定移液管从适当设计的储液槽(槽)中输送，储液槽可容纳约30-50毫升溶液。

        一般的实验室玻璃器皿需要，如5毫升和25毫升的玻璃瓶或塑料瓶，以及10毫升、5毫升和1毫升的移液管。

1.2 移液管的性能评估 

        移液误差通常是诊断实验室检测结果不可靠的主要原因。本文提出了一种简单的控制技术来解决这一问题。每个工作日开始时，应检查吸液器的外表面是否有灰尘和污垢。

        特别要注意尖锥。除70%乙醇外，不得使用其他溶剂清洗移液管。

1.2.1 短期性能评估: 使用刻度尖端控制移液器校准

        这个练习只需要几分钟，但它会使你绝对有信心防止与移液管功能相关的移液错误。

1. 根据随附的制造商说明设置移液管的体积。

2. 将有刻度的尖端牢牢地放在尖端锥上。

3.将指定体积的蒸馏水吸入尖端。

4. 将填充的尖端保持在垂直位置几秒钟。

5. 检查泄漏。

6. 检查吸气音量是否与喷嘴刻度所指示的指定音量相对应。

7. 重复步骤1-6至少5次。

8. 练习反向和非反向移液技术。

Table 1

Example of Gravimetric Calibration Method Used for Three

Specified Volumes Pipet (40-200 µL) Nominal volume