ELISA实验指南（21）之ELISA的各个阶段详解（四）

      接着上一篇文章，今天我们继续来讲具体包被过程中影响包被的一些条件。

那么，在实际操作中，影响包被的还有哪些条件呢？

1. 结合能力  

      认识到塑料表面具有有限的吸附能力是很重要的。 蛋白质附着在微孔板孔上的能力受到吸附在特定微孔板上的蛋白质的确切性质的影响。 当添加为50 µL体积时，各种蛋白质的饱和水平在每孔50-500 ng之间是有效的。 如果增加附着蛋白质的体积，每孔蛋白质的有效重量可以增加，有效地增加塑料与包被抗原接触的表面积。如果实际添加的蛋白质浓度(已知)与刚刚给出的值之间存在明显的差异，则应重新检查ELISA的滴定。 因此，如果需要1-10 mg/mL(或更大)浓度的样品来包被孔，这不是一个理想的情况。 

2. 非特异性结合  

      与抗原/抗体相互作用不同，这种吸附过程是非特异性的。 因此，在分析过程中的任何阶段，任何物质都有可能吸附到塑料上。 在试验设计中必须考虑到这一点，因为试剂可能与这些物质发生反应。 高水平的非特异性结合可以通过改变依赖于抗原的直接吸附系统和使用三明治技术来缓解，在三明治技术中特异性抗体捕获和浓缩特异性抗原。 

3. 共价抗原附着

      将蛋白质与塑料结合在一起的各种化学物质被用来防止脱附，因为抗原是共价结合的。 这些化合物包括水溶性碳二亚胺、亚胺和琥珀酰亚胺酯、乙烷磺酸和戊二醛。 用高分子量聚合物如聚戊二醛和聚赖氨酸预包板是另一种选择(4,5)。 这些分子能高效地附着在平板上，并作为非特异性粘附分子。 这种方法对于高碳水化合物含量的抗原特别有用，因为这些抗原通常很难与塑料结合。 

声明：本文引用自The ELISA Guidebook一书，欢迎转发分享，一起学习进步。