ELISA实验指南（18）之ELISA实验的各个阶段详解（一）

1. ELISA的各个阶段

      本章介绍了ELISA的基本特点。这些可以概括如下：

      A. 抗原或抗体吸附在塑料固相上；

      B. 添加试验样品和后续试剂；

      C. 反应物的孵育；

      D. 洗涤分离结合反应物和游离反应物；

      E. 加入酶标试剂；

      F. 添加酶检测系统(显色)；

      G. 测定的视觉或分光光度读数。

1.1 固相

      最广泛使用的固相是由聚氯乙烯(柔性板)或聚苯乙烯(刚性板)制造的96孔微孔板。许多厂家提供了用于ELISA设计的板，并提供了标准化产品。来自不同厂家的多种平板的使用已有广泛的生物调查报道。不可能推荐一种产品作为普遍接受的板块。在已经制定了具体的检测方法的情况下，使用建议的平板是谨慎的；但是，由于在实际中，板材之间的差异相对较小，只要进行适当的标准化，就有可能使用不同的板材进行相同的试验。在这方面，处理涉及不同抗原和抗体的大量ELISA的实验室可以使用相同类型的板进行标准化检测。理想情况下，建议使用平底孔，其中使用分光光度读数来评估颜色的发展。然而，圆底孔可以用于对ELISA进行视觉(眼睛)评估。这样的板可以通过分光光度计读取，但不是理想的。

      由于不能自动假定平板的性能不会发生变化，因此对于给定的分析，应在常规基础上检查平板的性能。这一点在收到不同批次的板材时尤为重要。批号通常可以从提供板子的盒子和伴随板子的文档中获得。有些板材还在塑料上印有代号，用以标识其制造中使用的特定凭证。实践中，有时甚至在提供担保凭证的情况下，也会送出质量较差的板子。

声明：本文引用自The ELISA Guidebook一书，欢迎转发分享，一起学习进步。