ELISA实验指南（15）之该如何选择ELISA的检测方法呢（四）

1. 场景A

      直接在ELISA中使用粗抗原可能是不成功的，因为它可能相对于其他蛋白处于较低浓度，因而只能在较低浓度下附着。这将导致如直接法和间接法ELISA不可用，以及基于这些的竞争性ELISA方法也不可用。

      由于抗该抗原的兔血清是可用的，可用作捕获血清(或作为捕获IgG制剂)，涂在孔板上以捕获粗抗原，给予较高的浓度以允许结合。因此，使得夹心法ELISA以及基于此法的竞争与抑制ELISA检测系统变得可用。

      任何结合试验抗体均来自牛，因此用抗牛结合物进行检测。这可能造成问题，因为粗抗原被用来提高兔血清抗体滴度。因此，可以在兔体内产生针对污染蛋白的抗体。被检测的牛血清可能与这种捕获的污染物发生反应。但是，当抗原为传染性物质时，可能不会产生针对污染蛋白的抗体，从而消除了问题。

      当抗原作为疫苗使用时，使用与原抗原相似的相对粗糙的制剂来制备疫苗，就会出现这个问题。可以尝试使兔血清对所期望的抗原靶点具有特异性。

      含有污染粗组分(除目标抗原)的固相免疫吸附剂可用于去除兔血清中的抗粗组分抗体，然后可作为捕获血清进行滴定。口蹄疫病毒抗体的滴定就是一个例子。病毒是在含牛血清的组织细胞中培养的。即使从这种制剂中纯化了病毒，少量的牛血清也会污染病毒。当这种纯化的病毒作为灭活制剂注射到实验动物体内时，会产生大量的抗牛抗体和抗病毒抗体。该血清不能作为用于检测以组织细胞(含牛血清)培养的病毒的捕获系统，因为它也捕获牛血清。由于捕获的抗体与检测的牛血清反应强烈，因此不适合从牛血清样品中捕获相对纯的病毒进行牛抗体滴定。因此，捕获血清必须被固相免疫吸附剂吸附，而固相免疫吸附剂是通过将牛血清附着在琼脂糖珠上获得的。

      一旦捕获血清的特异性被确定，就可以用已知的或几种已知的阳性牛血清在充分稀释范围内优化粗抗原浓度。纳入稀释范围的阴性血清可以评估不同稀释血清阴性和阳性血清之间的差异。下面的图表说明了用这些试剂建立夹心法ELISA试验的方法。本实验是通过用兔血清固相特异性捕获足够的抗原而实现的。

声明：本文引用自The ELISA Guidebook一书，欢迎转发分享，一起学习进步。