ELISA实验指南（13）之该如何选择ELISA的检测方法呢（二）

1. 评估需求

假设在需要开发酶联免疫吸附试验的领域有一些兴趣。这就意味着，我们已经从生物学的角度理解了这个问题，并对有关目标抗原和任何药剂与动物之间可能的相互作用的文献进行了评价。如果缺乏这方面的知识，应通过与其他工作人员接触和阅读与该领域和相关领域相关的文献来寻求，包括对以前开发的检测方法(包括任何elisa)的关键评估。虽然这似乎是显而易见的，但不幸的是，能够让“新”测定法和比较数据评估更快速发展的现成信息往往被忽视。

例如:

a. 我们可能有一种抗原，可能知道很多，也可能知道很少。

b. 我们可能有高浓度的确定的蛋白质/多肽/已知氨基酸序列的多肽，或者有浓稠的混合蛋白液，其中含有被宿主细胞蛋白质污染的低浓度抗原。

c. 我们可能有抗抗原的血清。这可能是针对纯化抗原或粗提液。抗体可能是在特定的物种(如兔子)中产生的。我们可能有抗血清的IgG部分(或者很容易制造)。

d. 我们可能有抗抗原的血清(牛血清)。我们可能有单抗。我们可能来自不同物种的抗血清，如兔和豚鼠血清。类似系统的elisa试剂盒可能已经开发出来，并且可以在文献中找到。

e. 我们可能需要在分析中进行酶的反应，因此需要标记二抗结合物(最有可能是商业性的)，或者需要用酶标记抗原特异性血清我们必须决定买哪个商业产品。这取决于偶联物的特异性(抗全分子IgG，抗h链IgG，抗h链IgM，等等)。选择多少取决于分析的目的和设计。因此，我们可能希望确定牛对我们抗原的IgM反应，这将需要在ELISA协议的某个地方有一种抗IgM(特异性)抗体。

显然，进行酶联免疫吸附试验的基本需要必须在平板、移液管、缓冲液、酶标仪等方面加以解决。此外，如果需要开发一套可能用于通用分析的试剂，则需要尽早评估需求的规模。

因此，应该根据规定时间内所需的测试单位来估计可能使用的分析方法。这被转化为所需的抗原、抗血清和偶联物(平板、吸管头等)。这种需求可以与已经开发的需求(或需要生产的需求)相比较。

例如，可以开发一种依赖于单一兔抗血清的试验。最终体积可为30毫升。用于测定的效价可为1/1000。试验体积为50µL。因此，可单独试验的最大样本数为30 ¡Á 1000 ¡Á 20 = 600,000。

这可能足以对10个实验室(每年6万个样品)进行1年的普遍检测，或者如果每年对6000个样品进行检测，试剂可以为10年的检测得到令人满意的结果。但是，如果兔血清滴度为1 / 100，这有效地只给检测6万份样品足够的试剂，这对于一个普适性的检测可能太少。

尽管这是一种简单化的方法，但对于ELISA为什么要被开发的早期认识是必不可少的，这种认识往往被遗忘，直到普遍需求被考察。这种方法也应考虑到抗原的产生，特别是当这可能比较困难时。这种考虑还可以修改所使用的具体系统的选择。因此，虽然可以获得利用纯化抗原的成功间接ELISA方法，但抗原的产量可能很低，而且处理费力而且昂贵，因此任何大规模的试验都是禁止的。在夹心试验的发展中，可能通过使用捕获抗体和粗(更容易获得)抗原制剂来缓解这一问题。

这种方法扩展到偶联物，其中可能有某些商业产品或当地生产的试剂，确定了ELISA的成功。这是为了确保试剂供应的连续性和标准化，必须有足够的数量来满足长期需求。

声明：本文引用自The ELISA Guidebook一书，欢迎转发分享，一起学习进步。