间接夹心法C-ELISA与I-ELISA的应用

ELISA实验指南（11）之竞争与抑制夹心法ELISAs检测（三） 

间接夹心法C-ELISA与I-ELISA的应用

1. 间接夹心法C-ELISA检测抗体

读者应重新审视间接夹心ELISA的组成成分。在这里，正如在直接夹心体系中，抗原被结合在孔板中的抗体捕获。不同之处在于首先用未标记抗体检测抗原，反过来用标记二抗结合物检测并定量。试剂/样品加入的确切时间决定了系统是否真正在检测竞争或抑制。下面的示意图说明了可以在哪里添加样品来与预设的间接夹心体系竞争。 

关键是抗体( AB )酶结合物不与待测样品中含有的抗体结合。竞争程度与待测样品中抗体含量成正比。与直接夹心法相比，该系统在捕获抗原的不同检测抗体( AB )的使用上具有更大的灵活性。该体系避免了检测抗体( AB )时每一份血清都要产生特异性的偶联物，从本质上讲，这也有利于更自然的反应，因为酶分子直接引入抗体会影响抗体的亲和力(因此检测AB的整体亲和力)。因此，这种系统是理想的，在这种系统中，抗原必须被捕获，在这种系统中，许多检测血清必须进行分析，而不需要进行化学或物理修饰。这也适用于下面描述的ELISA系统。

2. 间接夹心法I-ELISA检测抗体

抗体的间接夹心I-ELISA与C-ELISA相似，只是改变了试剂加入的时间，以增加反应的机会。这在下面的图表中得到了说明。

3.间接夹心法C-ELISA检测抗原

这种形式的抗原检测(间接夹心I-ELISAs )的主要问题是孔板上涂有捕获抗原的抗体。因此，待测样品中任何后续添加的抗原如果与最初添加的包被抗原不完全饱和，都会与孔板结合。体系的制备则要求没有游离抗体包被孔板。因此，预试验的具体条件可能与1.和2.项中所审查的抗体有所不同。抗原必须过量，如下图所示。

添加的可能含有抗原的试验样本与检测的二抗( AB )之间存在竞争阶段，如下图所示。

4. 抗原间接Sandwich I-ELISA

抗原的间接夹心I-ELISA与C-ELISA本质上是一样的，除检测的二抗( AB )与试验抗原混合后分别孵育后再加入含有捕获抗原的孔。

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