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ELISA实验指南(9)之竞争与抑制夹心法ELISAs检测(一)
竞争与抑制夹心法ELISAs检测 参考前几节的内容,我们知道夹心法ELISA检测也是通过直接和间接两种形式进行的,即两者都涉及利用固相上的固定抗体捕获抗原。对于直接夹心法ELISA,检测抗体用酶标,而间接系统中检测抗体不用酶标,反过来用抗体偶联物检测。 这两个系统都比以前描述的复杂,因为涉及的阶段更多。因此,在相互竞争或抑制步骤变化的可能性增加。必须把注意力集中在与其它体系相比而为什么使用某种系统上。 使用夹心法分析的要点是,通常通过使用特定的捕获血清从混合物中浓缩特定抗原,这对抗原的呈现可能是必不可少的。因此,竞争/抑制技术的优势依赖于抗原捕获。检测抗体的直接或间接测量是否使用,完全取决于使用何种检测方法。本部分涵盖了原则,进而突出了必须解决的问题。不适合的系统也会举例说明。 在后面的直接夹心法和间接夹心法介绍中描述了这些方法。直接夹心包括利用捕获物和直接标记的检测抗体( 2个抗体系统)进行检测,间接夹心包括利用3个抗体系统(用于检测血清的抗体偶联物)进行检测。它们被描述为检测抗原或抗体,如前几节。竞争( C )和抑制( I )试验的使用也作了说明。应注意修改基本的三明治体系,因为在应用竞争/抑制试验之前,必须对每个体系进行滴定以优化条件。 |