|
ELISA实验指南（6）之竞争法ELISA
竞争/抑制检测 术语竞争和抑制描述了一种测定法，其中测量涉及一种物质通过其干扰已建立的预滴定体系的能力进行定量分析的方法。该系统包括已经描述的所有其他ELISA体系。该方法也可用于抗体或抗原的检测。文献中使用的术语会导致混淆，阻断ELISA也经常被用来描述此类检测。本节描述了这类方法的可能应用，指出了优缺点。C-ELISA (竞争ELISA )和I-ELISA (抑制ELISA )一般用于描述涉及前面几篇文章中所述体系的检测，以及针对所检测的每个不同系统专门处理竞争或抑制检测的特殊应用。应参考前面对直接、间接和夹心ELISA的基本系统的描述，这些系统是C-I试验的基础。
1. 直接C-ELISA：检测抗原 在下图和图5中描述并显示了抗原的直接C-ELISA测试。通过添加抗原与原有体系竞争的方式来检测的直接系统。加入的效果通过预先配制的系统（用作对照）的预期颜色减少来衡量。因此，竞争阶段适当地从阶段iii开始，在阶段iii中，将样品添加到已经被动附着系统抗原的固相中。将该样品在封闭缓冲液中稀释以防止抗原非特异性结合至固相。在此阶段，就吸附而言什么也不会发生。然后加入标记抗体（对固相抗原特异）的稀释稀释液。现在开始竞争阶段，如果引入的测试抗原与固相抗原相同或相似，则竞争阶段将与引入的标记抗体结合（阶段iia）。适时竞争的程度取决于测试分子和固相抗原的相对浓度（以及抗原相似性的程度）。孵育和洗涤后，在添加底物后对测试中标记抗体的数量进行定量，依此类推。当测试样品中没有抗原时，或者当抗原相似性受到限制时，就不会与标记的抗体结合（ii b阶段）。因此，没有什么可以阻止（竞争）标记抗体的结合（阶段iii）。最终结果是，对于含有抗原的样品，竞争会影响预期的颜色，而在阴性样品中，竞争不会影响预期的颜色。
Fig. 5. Direct C-ELISA for antigen.Reaction of antigen contained in samples with the enzyme-labeled antibody directed against the antigen on the solid phase blocks the label from binding to the solid-phase antigen. If the antigen has no cross-reactivity or is absent, then the labeled antibody binds to the solid-phase antigen and a color reaction is observed on developing the test. 2. 直接C-ELISA：检测抗体 下面的图和图6中说明了抗体的直接C-ELISA检测。此处的检测体系与抗原的检测相同，但是是对抗体进行测量或比较。
Fig. 6. Direct C-ELISA for antibody. The degree of inhibition by the binding of antibodies in a serum for a pretitrated enzyme-labeled antiserum reaction is determined. 同样的这里需要滴定直接ELISA系统，然后通过添加测试抗体来竞争，这里的竞争是测试样品中的任何抗体与固相结合抗原上抗原位点的标记特异性抗体之间的。是将测试样品和预先标记的标记抗体混合，然后再添加到抗原包被的平板中。 |
