ELISA实验指南（4）之间接法ELISA

间接ELISA      

      在下图和图2中说明了间接ELISA。阶段i和ii与直接系统相似。阶段iii涉及添加未标记的检测抗体，将其在缓冲液中稀释以防止抗血清中的蛋白质非特异性地附着于固相（封闭缓冲液）。然后孵育并洗去多余的（未结合的）抗体，以实现特异性结合（iv阶段）。第v阶段是添加偶联物（酶标记的），抗物种抗体，在封闭缓冲液中稀释，然后再次温育和洗涤以实现结合物的结合（第vi阶段）。 vii）显色，然后将其停止（阶段viii）并在分光光度计中读取（阶段ix）。

      间接系统与直接系统的相似之处在于，抗原直接附着于固相并被添加的抗体（检测抗体）靶向。但是，这些添加的抗体没有被酶标记，而是被与酶连接的抗体所靶向。产生针对产生检测抗体的物种的免疫球蛋白的此类抗体，被称为抗物种缀合物。因此，如果检测抗体是在兔中产生的，则酶标记的抗体本质上必须是抗兔Ig。这允许在使用抗物种结合物时具有极大的灵活性，因为结合物的不同特异性可用于检测测定中特定的免疫球蛋白结合，并且实际上有成千上万种可商购的结合物。例如，抗物种缀合物可以是抗IgM，抗IgG 1，IgG 2等。

Fig. 2.Indirect ELISA. Antibodies from a particular species react with antigen attached to the solid phase. Any bound antibodies are detected by the addition of an antispecies antiserum labeled with enzyme. This is widely used in diagnosis.

      间接体系提供的优点是，可以使用单个抗物种结合物检查任意数量的抗血清与给定抗原的结合。这样的系统已经在诊断应用中被大量利用，特别是在检查（筛选）大量样本时。这种系统具有的一个问题是单个血清中不同程度的非特异性结合。这往往会扩大分析结果中的分散度（变异性），因此增加了处理许多血清以评估置信度的需要。

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