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ELISA实验指南之ELISA检测体系

ELISA检测体系

本章定义了ELISA的术语并考察了用于大多数应用的配置。

这样的一章很重要,因为必须了解ELISA系统所固有的各种可能性,才能最大限度地发挥它们在检测设计中的通用性。所有异构系统都有三个基本参数:

 1 .其中一个反应物附着在固相上,通常是一个塑料微孔板,其规格是8*12即96孔板。

 2 .结合试剂和游离试剂的分离,是通过加入固相洗液,通过简单的洗涤步骤进行。

 3 .结果是通过显色得到的。

 

( 1 )术语定义

      免疫检测是以抗体为试剂的相关试验。

      酶联免疫检测是利用一种免疫检测中附着在其中一个反应物上的酶,在加入合适的底物/显色原后,通过显色进行定量。

      如上所述,ELISA方法是通过洗涤步骤将结合试剂和游离试剂孵育分离,逐步加入和反应到固相结合物质上。

      酶促反应,是通过使用酶标记的反应物,使反应产生颜色并进行定量。表1给出了ELISA所用术语的定义。这些术语在随后的文本中被大量引用。

Table 1  Brief Definition of Terms

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( 2 ) ELISA基本体系

      本节介绍了ELISA中许多可能的配置所涉及的原理。这里的术语可能并不总是与其他人使用的术语一致,在仅用名称定义分析时需要注意。具体的检测参数必须始终在文献中仔细检查。下面的一组定义试图澄清大量已发表的描述“双夹心竞争ELISA”和“间接夹心抑制ELISA”等几个字所使用系统的方法。目的是要有一个明确的方法。三种主要方法构成了所有ELISA的基础方法:

 1 .直接ELISA法

 2 .间接ELISA法

 3 .夹心ELISA

      这三个方法体系都可以用来构成一组称为竞争或抑制ELISA的检测基础。

      通过符号的使用(如表2所示)和术语的使用来说明体系(试验中试剂的配置和使用)。这样,希望读者对各种体系及其相对优缺点有一个清晰的认识。              ELISA的灵活性的一个关键特点是可以使用多个体系来测量同一事物。这使得一些范围可以使分析适应可用试剂,也可以通过鉴定需要制备额外试剂来注意需要改进的地方。例如,可能需要单克隆抗体( mAbs )来赋予分析所需的特异性,或者需要针对免疫球蛋白( Ig )亚类的特定抗物种抗体偶联物。

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声明:本文引用自The ELISA Guidebook一书,欢迎转发分享,一起学习进步。

 


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