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ELISA学习之——ELISA与其他学科的关系综述

ELISA与其他学科的关系综述


      本章考察了允许最佳使用ELISA技术需要哪些科学领域,并注意了它们之间的关系。这种信息对学生和指导学生的人都是有用的。图表,附有对关键点的简要描述,用来说明这样的关系。本练习的内在是操作者在使用ELISA时对其确切要求的考虑。在制定工作ELISA的发展工作中以及设计的任何试验的最终价值中,都必须注意所强调领域的知识。应注意尽可能明确ELISA的目标。针对特定疾病的诊断试验的开展,需要了解与该疾病生物学相关的所有其他数据,如抗原性和药物结构、感染后不同动物产生抗体、不同检测方法对抗体的定性评估、标准或对照血清的可获得性等。必须注意现有的实验室设施,如设备、已经开发的试剂、小型实验动物、大型实验动物、购买商品的现金以及受过培训的人员。这样,产生一个可持续的测试来解决所定义的问题的机会就明显大于当一个测试是由一个拙劣或没有前向规划参与的技术来开发的。


图1强调我们考虑的是涉及分离步骤和固相的非均相ELISA。ELISA的四大优点被提升,所有这些都增加了ELISA技术能继续成功的理由。

1-图1

Fig. 1. Scheme showing features of ELISA that make it advantageous for a wide range of applications.


图2讨论了ELISA的系统,显示了在这些阶段所需要的各个阶段要做的准备工作和重要的因素。

1-图2

Fig. 2.  Scheme relating stages in ELISA. Specific stages vary according to the system utilized.


图3强调,使用这些设备进行ELISA需要技能,需要身体和心理过程。图3还表明需要维护仪器以达到最佳性能。

1-图3

Fig. 3.  Scheme relating equipment needs and skills for ELISA.


图4处理了ELISA中的一些酶系统,并说明了为了使最佳性能得以保持,需要了解的领域。了解酶动力学、催化反应、危害和缓冲液配方( pH控制)都是必不可少的。

1-图4

Fig. 4.  Relationships of enzyme systems to components of ELISA.


图5说明了ELISAs在结合和抑制/竞争相互作用中的应用,以允许对一个问题的理解。必须了解抗体和抗原的化学和物理本质,特别是在发育工作的情况下。由于需要充分了解正在检查的试剂的抗原特性,以便最大限度地利用ELISA,特别是如果要解释结果的话。

1-图5

Fig. 5.  Requires features in immunological understanding in order to establish ELISA.


图6涉及数据处理和分析。如果要解释数据,必须阐明各种必要的统计参数。这一点在理解如何计算一个结果的方差时是正确的,也适用于考察种群。这些研究实际上定义了任何ELISA的性能,允许对结果的信心被测量,从而允许对结果赋予意义。还需要参照标准控制检测的概念。

1-图6

Fig. 6.  Important statistical factors needed to make use of ELISA. Note the links to quality control (internal) and the establishment of confidence in test results. Increasingly, assays need international recognition.


图7将统计学认识的运用扩展到流行病学的需要。ELISA的一个常用方法是提供所研究群体的数据。在规划疾病控制策略时,采样的区域(大小、数量等)至关重要。这些简化概述在考虑任何ELISA的发展和具体使用时,都应作为参考点。他们应该帮助读者接触有限的ELISA,特别是在研究后面章节的细节。它们对于培训者在建立学生胜任能力领域也是有用的。

1-图7

Fig. 7. Scheme relating basic areas in epidemiology that need to be understood in the context of data obtained from ELISA. Note the strong link with statistics/sampling, which is inherent in the test design.


      这些都是在考虑以后使用ELISA时,在这一早期要注意的要点:

 1 . ELISA是一种解决问题的工具。

 2 .任何问题都应参照定义所涉具体代理人和相关代理人的所有以往工作,尽可能明确地加以定义。

 3 .分析问题的其他方法应予以检讨,特别是当试验已经建立时。如果ELISA要取代现有的检测,这就有影响。

 4 .测试能力需要解决。例如,当ELISA可以大规模使用(试剂盒)时,必须有足够的试剂、标准血清、偶联物(批)和抗原制剂。研究导致成功的试剂难以大规模制备、需要广泛的专门知识来制定或依赖于特定的有限批次的商品化试剂是不可持续的。

5 .当一项试验可能用于更广泛的科学家群体时,在开发试验时,应考虑可能的条件(实验室设施、专业知识)。这类技术转让因素是相关的,特别是在发展中国家的实验室。


       我们必须通过包括教科书在内的各种来源获得既要执行ELISA又要利用数据所需的知识和技能。与所有其他技术一样,最终的好处不是技术本身,而是对数据的有意义的收集和分析。所有这些例子中没有包括的一个因素是常识的因素:能够真正考虑自己在做什么、为什么以及不忽视为自己而被技术所忽视所需要的简单性。大多数问题在经过一些明确的思考后,再进行考察,相对简单。由此可见,好的ELISA人会首先考虑问题,获得进行一次试验所必需的技术技能和设备,然后从有计划的角度获得数据。从所有其他试验中获得的数据和科学文献同样应该寻求。这对于一个分析开发人员,以及使用一个提供的、预定的试剂盒的人来说都是如此。使用工具包所需要的技能不亚于开发人员的技能,的确,非熟练工人手中的工具包往往是无用的。ELISA实践中观察到的问题绝大多数(90%)是操作者缺乏常识、不懂得坚持说明书、技术粗糙或设备维护不善等原因造成的故障。剩馀的百分比大部分是由于水质不好造成的。

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声明:本文引用自The ELISA Guidebook一书,欢迎转发分享,一起学习进步。


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