详细说明

2X H-TECH SYBR qPCR Mix(5×1ML)

价格:350
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产品编号 NG-MQ001
  • 产品简介
  • 产品细节
  • 操作步骤

试剂原理

2X H-TECH SYBR PCR Premix 是一种采用SYBR® Green I*嵌合荧光法进行Real Time PCR的试剂,体系中有PCR反应的必要组分Taq酶,dNTP Mixture,Mg2+,Tli RNaseH,SYBR® Green I等,还有增强和稳定Real Time PCR反应的Buffer成分,可以有效抑制非特异性的PCR扩增,提高PCR的扩增效率,进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。

  

SYBR® Green I*与双链DNA结合后发出荧光,所以可以通过检测反应体系中的SYBR® Green I*荧光强度,达到检测PCR产物扩增量的目的。通过PCR反应生成双链DNA,SYBR® Green I*与双链DNA结合发出荧光,通过检测 PCR 反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的 DNA 片段的融解温度。

产品名称

货号

产品名称

规格

NG-MQ001

2X H-TECH SYBR qPCR Mix ,5ml

5ml


主要试剂和耗材
PCR 引物

灭菌蒸馏水

PCR板

微量移液器和枪头(高压灭菌)

适用的 Real Time PCR 扩增仪


需要使用ROX low  Dye 校正的仪器

Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System

Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR System (Life Technologies)


需要使用ROX high Dye 校正的仪器

Applied Biosystems 7500 和 7500 Fast Real-Time PCR System(Life Technologies)


需要使用 ROX Reference Dye 校正的仪器

Thermal Cycler Dice Real Time System

LightCycler®/LightCycler®480 System

Smart Cycler® System

CFX96™ Real-Time PCR Detection SystemBio-Rad)等


ROX参考货号:

货号

产品名称

规格

NG-MQ001-R

ROX low Dye 50X + ROX high Dye  50X

200ul+200ul


存:

4℃保存 7天,-20℃一年以上

避光保存,避免污染。

冰袋运输,到货后-20℃避光保存。


 注意事项:

1. 此试剂久置会有微量沉淀,为正常现象

2. 使用时请上下颠倒均匀混合,避免产生气泡,请勿涡旋剧烈振荡混匀。

3. 配制 PCR 反应液时应避免强光照射。试剂和引物、模板混合后尽快实验,效果最佳。

4. 配制反应液时,试剂请于冰上放置。

5. 95℃预热时间最低不少于0.5 min;

 

特别提示:本公司提供qPCR上机实验以及mRNA,lnRNA,circle RNA引物探针设计合成验证一条龙服务。


2X H-TECH SYBR qPCR Mix(5×1ML)
 
 

 操作方法

配制 PCR 反应液(反应液配制请在冰上进行)。

ROX反映体系

试剂

20μl体系(其他体系按比例调整)

终浓度

2x PCR Premix

10.0μl

PCR Forward Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

 

0.2~0.25μM

PCR Reverse Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

0.2~0.25μM

DNA template

1ng~100ng(cDNA推荐)

0.05~5 ng /μl

ddH2O

补水至20μl

 

使用ROX反映体系

试剂

20μl体系(其他体系按比例调整)

终浓度

2x PCR Premix

10.0μl

PCR Forward Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

 

0.2~0.25μM

PCR Reverse Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

0.2~0.25μM

ROX low Dye  or

0.4μl

ROX high Dye *2

 

 

DNA template

1ng~100ng(cDNA推荐)

0.05~5 ng /μl

ddH2O

补水至20μl

 

 

*1 通常引物终浓度为 0.2 μM,可以在 0.1~1.0 μM 范围内调整。

 

*2 ROX high Dye比ROX low Dye浓度高,使用 7500 Real-Time PCR System时,使用ROX low Dye。使用7300 Real-Time PCR System 和StepOnePlus时,使用OX high Dye。

 

*3 在 20 μl 反应体系中,DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同模板中含有的目的基因拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定最佳的模板添加量。

 

Real Time PCR 上机程序举例:

建议采用两步法 PCR 反应程序

由于使用 Tm 值较低的引物等原因,两步法 PCR 反应扩增性能较差时,可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。

 

应用ABI  7300/7500 和StepOnePlus 两步法 PCR 扩增标准程序:

Stage 1 1个循环 预变性 95℃ 3 分钟

Stage 2:40个循环  95℃/3秒  60℃/30秒  72℃/60秒

Stage 3: Melt Curve or Dissociation stage

实验结果分析:确认 Real Time PCR 的扩增曲线和融解曲线等。

 

应用 CFX96™两步法 PCR 扩增标准程序:

Step 1:1个循环 预变性 95℃ 3 分钟 

Step 2:GOTO:39(40 个循环) 95℃ 5 秒 60℃ 30 秒 72℃  60秒

Step 3:Melt Curve

实验结果分析:确认 Real Time PCR 的扩增曲线和融解曲线等。

沪公网安备 31011402005773号

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